葉綠素a經(jīng)常用于表征浮游藻類的生物量水平。因此，也可通過測(cè)定葉綠素a等光合色素反映水體的富營(yíng)養(yǎng)化程度?！端|(zhì) 葉綠素a的測(cè)定 分光光度法》（HJ 897-2017）規(guī)定了在實(shí)驗(yàn)室測(cè)定葉綠素a的丙酮萃取分光光度法，通過抽濾、研磨、萃取、離心和比色測(cè)定葉綠素a含量。雖然在實(shí)際工作中提出了用反復(fù)凍融取代研磨、用乙醇代替丙酮萃取等提高提取效率的優(yōu)化方法，但仍然存在葉綠素a容易在繁瑣的實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)生光降解的問題，所以需要在操作中盡量避光降低影響。

水質(zhì)葉綠素a檢測(cè)步驟詳解：

1.提取試劑

除熱乙醇法，國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)方法均采用90%丙酮作為提取試劑。EPA446.0指出，90%丙酮溶液可以有效提取大部分藻類細(xì)胞中的葉綠素a，而且不產(chǎn)生其他衍生物。丙酮是國(guó)際上較為公認(rèn)的提取葉綠素的試劑

2.濾膜

除《水和廢水檢測(cè)分析方法（第四版）》采用乙酸纖維濾膜外，均采用玻璃纖維濾膜。

3.樣品保存方法

樣品的保存條件各種方法略有不同，但水樣采集后均保證4℃冷藏保存，樣品濾膜可冷凍保存。而且葉綠素a測(cè)定樣品濾膜冷凍后再研磨，可提高提取效率。暨南大學(xué)水生生物研究所的林少君在《浮游植物中葉綠素a提取方法的比較與改進(jìn)》的研究結(jié)果。如采樣后不立刻測(cè)定，-18℃下冰凍，再于室溫條件下融解，利用細(xì)胞內(nèi)冰粒的形成和細(xì)胞液濃度的增高引起溶漲，使胞壁結(jié)構(gòu)破碎引起葉綠素溶出。

4.是否研磨及研磨后是否需要浸泡

雖然研磨的方法較為費(fèi)力，但是該方法操作簡(jiǎn)單，儀器設(shè)備要求低，常溫操作不會(huì)對(duì)葉綠素a造成破壞，細(xì)胞破碎完全，對(duì)葉綠素的提取速度快，效率高，并在環(huán)境監(jiān)測(cè)系統(tǒng)廣泛應(yīng)用，考慮到方法的經(jīng)典性和數(shù)據(jù)的可沿用性，新的技術(shù)線路中關(guān)于對(duì)葉綠素a的提取步驟沿用《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法（第四版）》中的研磨方法，研磨提取葉綠素a，主要通過機(jī)械作用破壞藻類的細(xì)胞壁和葉綠體使葉綠素a溶解于丙酮，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)。

5.計(jì)算公式及波長(zhǎng)

關(guān)于計(jì)算方法，主要有三色法和單色法，三色法主要考慮了葉綠素b和葉綠素c對(duì)測(cè)定的干擾，測(cè)定的是表觀葉綠素a的含量（包括葉綠素a與脫鎂葉綠素a之和），單色法考慮脫鎂葉綠素a的干擾。從方法的簡(jiǎn)便性來說，三色法操作簡(jiǎn)單，產(chǎn)生誤差幾率小，耗時(shí)比單色法短；目前《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法（第四版）》中測(cè)定葉綠素a的方法在地表水環(huán)境監(jiān)測(cè)中應(yīng)用最為廣泛，該方法采用丙酮研磨提取葉綠素a，用三色法計(jì)算葉綠素a的濃度。